443143416貨號：A105-50
規(guī)格：50rxn
保存：-20℃避光保存兩年
【產(chǎn)品概述】
RT SuperMix with dsDNase是將RNA逆轉(zhuǎn)錄成為cDNA更為簡便的操作系統(tǒng)，含有第一鏈cDNA合成所需的所有試劑，只需加入RNA模板和水即可進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。合成的第一鏈cDNA可廣泛用于文庫構(gòu)建、第二鏈合成、雜交、PCR擴增、RT-qPCR檢測等。試劑盒中包含新一代的逆轉(zhuǎn)錄酶和優(yōu)化的緩沖液，與普通逆轉(zhuǎn)錄酶系統(tǒng)相比，具有逆轉(zhuǎn)錄能力強（合成較多全長cDNA）、無RNase H活性、熱穩(wěn)定性高和半衰期長等優(yōu)點。該逆轉(zhuǎn)錄酶產(chǎn)物得率更高，獲得的cDNA片段更長，模板使用范圍更廣等特點。5×Reaction Mix包含逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需的緩沖液，dNTPs及優(yōu)化的逆轉(zhuǎn)錄引物，Supreme Enzyme Mix包含Reverse Transcriptase，Ribonuclease Inhibitor和dsDNase，以簡化加樣步驟。試劑盒中含有的新型dsDNase，能夠特異性去除雙鏈DNA，而不消化RNA樣品、逆轉(zhuǎn)錄引物及合成的cDNA，并且具有熱敏感性，可在55℃快速不可逆失活，實現(xiàn)去除基因組污染與逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的同步進行。
【第一鏈cDNA合成】
- 在RNase-free離心管中配制如下混合液，輕輕混勻以下成分：
| Component | Volume |
| 10 pg-5 μg Total RNA or 10 pg-500 ng mRNA*1 | As Required |
| DEPC-treated Water | up to 13 μl |
| 5×Reaction Mix*2 | 4 μl |
| Supreme Enzyme Mix | 3 μl |
*1：為保證逆轉(zhuǎn)錄成功，請使用高質(zhì)量RNA模板。
*2：5×Reaction Mix在使用前需充分混勻。
- 按照下表所示進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：
| Temperature | Time | Note |
| 25℃ | 10 min | 隨機引物與RNA模板配對及去除基因組DNA |
| 55℃ | 15 min | 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)及dsDNase快速滅活 |
| 85℃ | 5 min | 逆轉(zhuǎn)錄酶滅活 |
- 產(chǎn)物可立即用于PCR或qPCR反應(yīng)，或在-20℃保存，并在半年內(nèi)使用；長期存放建議分裝后在-70℃保存。cDNA應(yīng)避免反復(fù)凍融。
【注意事項】
防止RNase污染：操作時需穿戴手套、口罩和工作服，實驗用的耗材均需保證RNase-free。
【備注】
本產(chǎn)品僅供科研使用。在確認(rèn)產(chǎn)品質(zhì)量出現(xiàn)問題時，本公司承諾為客戶免費更換等量的合格產(chǎn)品。 在所有情況下，本公司對此產(chǎn)品所承擔(dān)的責(zé)任，僅限于此產(chǎn)品的價值本身。