產(chǎn)品介紹：

pcDNA3.1(+)是源自pcDNA3的5.4kb載體，專為在哺乳動物宿主中高水平穩(wěn)定和瞬時表達而設(shè)計。在大多數(shù)哺乳動物細(xì)胞中可以進行高水平的穩(wěn)定和非復(fù)制性瞬時表達。載體包含以下元件：人巨細(xì)胞病毒即刻早期（CMV）啟動子在多種哺乳動物細(xì)胞中高水平表達；用于篩選穩(wěn)定細(xì)胞系的新霉素抗性基因等。

基因克隆方法應(yīng)用廣泛的有酶切連接克隆和無縫克隆，酶切連接克隆的載體制備對于新手來說比較麻煩，需要準(zhǔn)備載體以及PCR產(chǎn)物還需要進行酶切和回收等多個步驟。無縫克隆只要準(zhǔn)備好載體，PCR產(chǎn)物回收后可以直接用于連接，大大縮短試驗時間。

使用方法：

1、本產(chǎn)品是將pcDNA3.1（+）載體用BamHI和XhoI雙酶切后，回收的線性化載體。

2、無縫克隆引物設(shè)計方法，當(dāng)做克隆載體使用，可以在擴增PCR產(chǎn)物的：

（1）上游引物5’端添加序列：TTAAGCTTGGTACCGAGCTCGGATCCACCATG。（其中劃線部分為載體上的序列，CCACCATG為KOZAK序列，ATG為翻譯起始位置，注意不要移碼。）

（2）下游引物5’端添加序列：TAAACGGGCCCTCTAGACTCGAGTCA。（其中劃線部分為載體上的反向序列，TCA為終止密碼子）。

3、測序引物

（1）上游引物T7：TAATACGACTCACTATAGG

（2）下游引物BGH：TAGAAGGCACAGTCGAGG

產(chǎn)品介紹：
pET-32a(+)載體是原核表達載體，用于表達可溶性、具有活性功能的蛋白；具有N端Thrombin（凝血酶）酶切位點，N端腸激酶酶切位點，帶氨芐抗性。
基因克隆方法應(yīng)用廣泛的有酶切連接克隆和無縫克隆，酶切連接克隆的載體制備對于新手來說比較麻煩，需要準(zhǔn)備載體以及PCR產(chǎn)物還需要進行酶切和回收等多個步驟。無縫克隆只要準(zhǔn)備好載體，PCR產(chǎn)物回收后可以直接用于連接，大大縮短試驗時間。

使用方法：

1、本產(chǎn)品是將pET-32a(+)載體用BamHI和XhoI雙酶切后，回收的線性化載體。

2、無縫克隆引物設(shè)計方法，當(dāng)做克隆載體使用，可以在擴增PCR產(chǎn)物的：

（1）上游引物5’端添加序列：GACAAGGCCATGGCTGATATCGGATCC。

（2）下游引物5’端添加序列：CAGTGGTGGTGGTGGTGGTGCTCGAG。

3、測序引物：

（1）上游引物T7：TAATACGACTCACTATAGGG。

（2）下游引物T7-ter：TGCTAGTTATTGCTCAGCGG。

產(chǎn)品介紹：
pET-28a(+)載體是原核表達載體，帶卡那抗性。
基因克隆方法應(yīng)用廣泛的有酶切連接克隆和無縫克隆，酶切連接克隆的載體制備對于新手來說比較麻煩，需要準(zhǔn)備載體以及PCR產(chǎn)物還需要進行酶切和回收等多個步驟。無縫克隆只要準(zhǔn)備好載體，PCR產(chǎn)物回收后可以直接用于連接，大大縮短試驗時間。

使用方法：

1、本產(chǎn)品是將pET-28a(+)載體用NcoI和XhoI雙酶切后，回收的線性化載體。

2、無縫克隆引物設(shè)計方法，當(dāng)做克隆載體使用，可以在擴增PCR產(chǎn)物的：

（1）上游引物5’端添加序列：TAACTTTAAGAAGGAGATATACC。

（2）下游引物5’端添加序列：TCAGTGGTGGTGGTGGTGGTGCTCGAG。

3、測序引物：

（1）上游引物T7：TAATACGACTCACTATAGGG。

（2）下游引物T7-ter：TGCTAGTTATTGCTCAGCGG。

?產(chǎn)品介紹：
pDC316-ZsGreen1-shRNA體是Admax腺病毒穿梭載體，用于RNA干擾，該載體帶綠色熒光蛋白ZsGreen1基因，和pBHGlox_E1,3Cre骨架載體一起包裝重組腺病毒用。
基因克隆方法應(yīng)用廣泛的有酶切連接克隆和無縫克隆，酶切連接克隆的載體制備對于新手來說比較麻煩，需要準(zhǔn)備載體以及PCR產(chǎn)物還需要進行酶切和回收等多個步驟。無縫克隆只要準(zhǔn)備好載體，PCR產(chǎn)物回收后可以直接用于連接，大大縮短試驗時間。

使用方法：

1、本產(chǎn)品是將pDC316-ZsGreen1-shRNA載體用PstI和BamHI雙酶切后，回收的線性化載體。

2、無縫克隆引物設(shè)計方法，當(dāng)做克隆載體使用，可以在擴增PCR產(chǎn)物的：

（1）上游引物5’端添加序列：CTTGTGGAAAGGACGAAACACCTGCAG。

（2）下游引物5’端添加序列：TCGAAGTCGAGGTCGACATTGGGATCC。

3、測序引物M13R：CAGGAAACAGCTATGAC。

產(chǎn)品介紹：

pDC316載體是Admax腺病毒穿梭載體，該載體不帶綠色熒光蛋白基因，和pBHGlox_E1,3Cre骨架載體一起包裝重組腺病毒用。

基因克隆方法應(yīng)用廣泛的有酶切連接克隆和無縫克隆，酶切連接克隆的載體制備對于新手來說比較麻煩，需要準(zhǔn)備載體以及PCR產(chǎn)物還需要進行酶切和回收等多個步驟。無縫克隆只要準(zhǔn)備好載體，PCR產(chǎn)物回收后可以直接用于連接，大大縮短試驗時間。

使用方法：

1、本產(chǎn)品是將pDC316載體用EcoRI和HindIII雙酶切后，回收的線性化載體。

2、無縫克隆引物設(shè)計方法，當(dāng)做克隆載體使用，可以在擴增PCR產(chǎn)物的：

（1）上游引物5’端添加序列：ACCACCGTAGAACGCAGATCGAATTCCACCATG。（其中劃線部分為載體上的序列，CCACCATG為KOZAK序列，ATG為翻譯起始位置，注意不要移碼。）

（2）下游引物5’端添加序列：TGCTCGAAGTCGACGAGCTCAAGCTTCA。（其中劃線部分為載體上的反向序列，TCA為終止密碼子）。

3、測序引物

（1）上游引物pDC316F：ACGTGGGTATAAGAGGCG

（2）下游引物M13R：CAGGAAACAGCTATGAC

產(chǎn)品介紹：

pDC316-mCMV-EGFP載體是Admax腺病毒穿梭載體，該載體帶綠色熒光蛋白基因，和pBHGlox_E1,3Cre骨架載體一起包裝重組腺病毒用。

基因克隆方法應(yīng)用廣泛的有酶切連接克隆和無縫克隆，酶切連接克隆的載體制備對于新手來說比較麻煩，需要準(zhǔn)備載體以及PCR產(chǎn)物還需要進行酶切和回收等多個步驟。無縫克隆只要準(zhǔn)備好載體，PCR產(chǎn)物回收后可以直接用于連接，大大縮短試驗時間。

使用方法：

1、本產(chǎn)品是將pDC316-mCMV-EGFP載體用NheI和HindIII雙酶切后，回收的線性化載體。

2、無縫克隆引物設(shè)計方法，當(dāng)做克隆載體使用，可以在擴增PCR產(chǎn)物的：

（1）上游引物5’端添加序列：CTATAGGGAGACCCAAGCTGGCTAGCCACCATG。（其中劃線部分為載體上的序列，CCACCATG為KOZAK序列，ATG為翻譯起始位置，注意不要移碼。）

（2）下游引物5’端添加序列：CTGATCAGCGGTTTAAACTTAAGCTTCA。（其中劃線部分為載體上的反向序列，TCA為終止密碼子）。

3、測序引物

（1）上游引物T7：TAATACGACTCACTATAGG

（2）下游引物BGH：TAGAAGGCACAGTCGAGG

①擁有目前最強，調(diào)控機理最嚴(yán)格的啟動子之一醇氧化酶基因AOX1啟動子，非常利于外源基因的表達調(diào)控；

②具有翻譯后的蛋白加工修飾功能例如磷酸化、糖基化等，是一種不可多得的集聚多種優(yōu)勢的真核表達系統(tǒng)；

③ 既可以在細(xì)胞內(nèi)表達，也可在細(xì)胞外表達；

④培養(yǎng)基成本低廉，培養(yǎng)條件簡單，生長繁殖速度迅速；

⑤外源基因可以單拷貝或者多拷貝的形式在特定的位點整合進酵母染色體上，伴隨著染色體的復(fù)制而復(fù)制，有較高的遺傳穩(wěn)定性，同釀酒酵母一樣以穩(wěn)定的表達菌株存在；

⑥可以進行大規(guī)模發(fā)酵，適合高密度培養(yǎng)，非常適合重組真核蛋白的工業(yè)放大化生產(chǎn)制備。

畢赤酵母宿主菌常用的菌株類型有四種，分別是X33、GS115、KM71H、SMD1163/8。其中X33是野生型菌株，而GS115和KM71H兩種，都具有His4營養(yǎng)缺陷標(biāo)記。GS115?菌株具有AOX1基因，屬于Mut⁺，指的是甲醇利用正常型；KM71 H菌株的AOX1位點被ARG4基因插入，屬于Mut^s，指甲醇利用緩慢型，兩種菌株都適用于一般的酵母轉(zhuǎn)化方法。SMD116（his4 pep4）屬于蛋白酶缺失型菌株，它能夠表達一些由于蛋白降解而引起的的表達產(chǎn)物分布不均的問題。只是由于SMD116（his4 pep4）菌株生長緩慢，導(dǎo)致表達的外源蛋白質(zhì)產(chǎn)量低。

服務(wù)內(nèi)容：
1、亞克?。簛喛寺≈羶蓚€適當(dāng)?shù)谋磉_載體中，制備大量質(zhì)粒，構(gòu)建線性化載體。
2、表達條件優(yōu)化及評估：將線性載體轉(zhuǎn)化至適合的寄主菌株中，通過PCR方法確定陽性轉(zhuǎn)化株，表達條件優(yōu)化及確認(rèn)–確定培養(yǎng)基及誘導(dǎo)濃度，SDS-PAGE以及Western blot分析。
3、蛋白表達及純化：少量表達，純度達90%以上。
服務(wù)價格及周期：

載體選擇：

服務(wù)承諾：
1、基因合成和載體構(gòu)建參見相關(guān)服務(wù)部分。
2、本公司會在最短的時間內(nèi)快速完成實驗，并為客戶提供足量蛋白以滿足科研需求。
3、提供完整的實驗報告。
4、提供合乎客戶要求量和純度的特定蛋白。

慢病毒服務(wù)簡介:

慢病毒載體可以將外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體上，從而達到持久性表達目的序列的效果。在感染能力方面可有效地感染神經(jīng)元細(xì)胞、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞，從而達到良好的的基因治療效果。對于一些較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞， 如原代細(xì)胞、干細(xì)胞、不分化的細(xì)胞等，使用慢病毒載體，能大大提高目的基因或目的shRNA的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，且目的基因或目的shRNA整合到宿主細(xì)胞基因組的兒率大大增加，能夠比較方便快捷地實現(xiàn)目的基因或目的shRNA的長期、穩(wěn)定表達。

慢病毒(Lentivirus) 載體是以HIV-1 (人類免疫缺陷Ⅰ型病毒)為基礎(chǔ)發(fā)展起來的基因治療載體。區(qū)別一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，它對分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞均具有感染能力。所以，在體外實驗及體內(nèi)實驗的研究中，慢病毒己經(jīng)成為表達外源基因或外源shRNA的常用載體形式之一， 并且正在獲得越來越廣泛的應(yīng)用。

服務(wù)價格及周期:

備注：以上價格僅僅是病毒包裝的價格，不包含基因和載體構(gòu)建的費用。

慢病毒對照價格及周期:

慢病毒包裝系統(tǒng)組成:

慢病毒包裝系統(tǒng)一般由慢病毒表達載體和慢病毒包裝載體組成。慢病毒表達載體，即通常所說的穿梭載體，包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。而慢病毒包裝質(zhì)?？商峁┧械霓D(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達載體和包裝質(zhì)粒同時共轉(zhuǎn)染細(xì)胞，在細(xì)胞中進行病毒的包裝， 包裝好的假病毒顆粒分泌到細(xì)胞外的培養(yǎng)基中，離心取得上清液后，可以直接用于宿主細(xì)胞的感染?，F(xiàn)在的慢病毒包裝系統(tǒng)一般都是三質(zhì)粒或四質(zhì)粒包裝系統(tǒng)。其中四質(zhì)粒系統(tǒng)比三質(zhì)粒系統(tǒng)在生物安全性上更好一些，所以應(yīng)用較多。

慢病毒包裝系統(tǒng)載體選擇:

目前市面上常見的商業(yè)化慢病毒包裝系統(tǒng)較多，其中常用的有Clontech 、Invitrogen 等公司的相關(guān)產(chǎn)品。本公司通過大量實驗摸索，博采眾家之長，建立起了一套穩(wěn)定、可靠、高效的慢病毒包裝系統(tǒng)。這套慢病毒包裝系統(tǒng)， 其穿梭載體主要來自Clontech公司，包括以下載體：

轉(zhuǎn)染了紅色熒光蛋白載體或綠色熒光蛋白載體24小時后的病毒包裝293-t細(xì)胞熒光顯微鏡觀察結(jié)果：

您可以根據(jù)需要，選用合適的穿梭載體來裝載目的基因或者目的shRNA。在實際使用過程中，我們采用Clontech配套的慢病毒包裝質(zhì)粒pSPAX2和pMD2.G(或Invitrogen公司的pLPl 、pLP2 、pLP/VSVG質(zhì)粒）。

客戶須知:

1. 上述價格均不包括運輸費用。如果您需要干冰運輸，按照30元/公斤干冰計算，一般需要加10公斤干冰，即干冰運輸費用在300元左右。如果采用超低溫冰袋運輸，則運輸費用由AXYBIO公司承擔(dān)。我們將采用順豐快遞寄送，全國大部分城市隔天到貨。
2. 如客戶所需包裝的目的基因由客戶提供，則客戶應(yīng)提供所要構(gòu)建慢病毒的目的基因的序列及其它相關(guān)說明信息（例如裝載載體、質(zhì)粒圖譜、酶切位點等）。客戶應(yīng)對所提供的材料及信息負(fù)責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實驗延誤或經(jīng)濟損失由客戶承擔(dān)。
3. 如客戶訂購基因過表達的慢病毒，我們承諾交付的慢病毒的滴度不低于10⁷TU/ml，如果低于此滴度，我們將免費重新提供。如果重新提供的病毒還是達不到要求，我們將做退單處理，客戶不需支付任何費用。我們會盡量提供高滴度的慢病毒產(chǎn)品，但考慮到慢病毒包裝對外源表達框的限制，外源表達框較大時，病毒滴度會受到較大影響，因此，如病毒出毒實際滴度介于10⁷TU/ml和10⁸TU/ml之間，我們將按實際滴度出貨。表達shRNA的慢病毒，出毒滴度一般都可以達到10⁸TU/ml。
4. 如果shRNA序列由客戶提供，則本公司只負(fù)責(zé)證明包含有該shRNA序列的慢病毒構(gòu)建成功，而不對其干擾效率做任何保證。
5. 如客戶需委托本公司使用包裝好的慢病毒感染目的細(xì)胞，建立穩(wěn)定表達目的基因或目的shRNA的細(xì)胞系，則相關(guān)實驗費用另外計算。

附：慢病毒包裝和滴度測定流程

1 表達基因用慢病毒包裝載體準(zhǔn)備:

2 表達shRNA 用慢病毒包裝載體準(zhǔn)備:

3 質(zhì)粒準(zhǔn)備和轉(zhuǎn)染

將3或4種質(zhì)?；旌嫌?5 ml滅菌管中，采用Opti-MEM和Lipo2000進行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染方法參考Lipo2000標(biāo)準(zhǔn)PROTOCOL和本公司的實際經(jīng)驗。

4 收集第一輪的培養(yǎng)基上清

（1）轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞CO₂培養(yǎng)箱48 h，37℃，收集上清。
（2）收集的上清，4℃ 8000g離心10 min，除去細(xì)胞碎片，0.45 μm PVDF膜過濾。
（3）所得病毒液一部分用于測定病毒滴度，其余可凍存于-80℃。
（4）加入10ml新鮮的DMEM+2%NBS培養(yǎng)基。

5 收集第二輪的培養(yǎng)基上清

（1）加入新鮮培養(yǎng)基后，培養(yǎng)24小時。
（2）收集的上清，4℃ 8000g離心10 min，除去細(xì)胞碎片，0.45 μm PVDF膜過濾。
（3）所得病毒液一部分用于測定病毒滴度，其余可凍存于-80℃。

6 病毒的濃縮：離心方法采用差速離心法

（1）病毒上清經(jīng)0.45 μm濾膜處理，于4℃ 10,000g離心15 min。
（2）上清轉(zhuǎn)移至另一干凈離心管中，濾液在4℃，40,000g離心2 h。
（3）離心管置于冰浴條件下，用1%體積的DMEM+10% NBS重懸沉淀，重懸時使用同一吸管以避免損失，約每15 s吹打1次，避免產(chǎn)生氣泡。

7 測定病毒滴度（熒光顯微鏡計數(shù)）

（1）滴度測定前，以0.5×10⁵濃度種細(xì)胞293T于24孔板，每孔1 ml細(xì)胞培養(yǎng)基，過夜（12 h）培養(yǎng)使細(xì)胞在板底部形成單層，此時細(xì)胞密度大約為1.0×10⁵。
（2）取10 μl病毒液+90 μl培養(yǎng)基，依次稀釋得到10^-1至10^-8病毒稀釋液。24孔板依次加入梯度稀釋的待測病毒樣品20 μl，留一孔作為對照不加病毒，培養(yǎng)2天。
（3）熒光計數(shù)：熒光顯微鏡下計數(shù)帶有熒光的細(xì)胞數(shù)目
（4）計算病毒滴度：熒光細(xì)胞數(shù)目×稀釋倍數(shù)（10、10²…10⁸）/接種病毒

目前用芽孢桿菌系統(tǒng)成功表達的真核基因產(chǎn)物有白介素-3(IL-3)、乙肝核心抗原、乙肝PreS2抗原、丙肝病毒殼蛋白、HIV p4Ispf-1蛋白等；成功表達的原核基因產(chǎn)物有甘油-3-磷酸脫氫酶、甘油激酶、纖維素酶、色氨酸合成酶等。

本公司可以根據(jù)客戶需求進行載體改造和宿主菌改造，或者采用商業(yè)化的載體（pHT43載體，配套菌WB800或WB800N)，可以提供胞內(nèi)或胞外、組成型或誘導(dǎo)型的表達；可以提供GST、His、HA，F(xiàn)lag、myc、MBP等標(biāo)簽。

服務(wù)內(nèi)容：
1、亞克?。簛喛寺≈羶蓚€適當(dāng)?shù)谋磉_載體中，制備大量質(zhì)粒，構(gòu)建線性化載體。
2、表達條件優(yōu)化及評估：將線性載體轉(zhuǎn)化至適合的寄主菌株中，通過PCR方法確定陽性轉(zhuǎn)化株，表達條件優(yōu)化及確認(rèn)——確定培養(yǎng)基及誘導(dǎo)濃度，SDS-PAGE以及Western blot分析。
3、蛋白表達及純化：少量表達，純度達90%以上。
服務(wù)價格及周期：

載體選擇：

服務(wù)承諾：
1、基因合成和載體構(gòu)建參見相關(guān)服務(wù)部分。
2、本公司會在最短的時間內(nèi)快速完成實驗，并為客戶提供足量蛋白以滿足科研需求。
3、提供完整的實驗報告。
4、提供合乎客戶要求量和純度的特定蛋白。