The pET-30 Ek/LIC vector is prepared for rapid, directional cloning of PCR-amplified DNA for high-level expression of polypeptides. Using specifically designed primers for amplification and the pET-30 Ek/LIC Cloning Kit (Cat. No. 69077-3), inserts can be efficiently cloned without the need for restriction digestion or ligation. Fusion proteins contain N-terminal cleavable His?Tag? and S?Tag? sequences for detection and purification. Unique sites are shown on the circle map. Note that the sequence is numbered by the pBR322 convention, so the T7 expression region is reversed on the circle map. The cloning/expression region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below. The f1 origin is oriented so that infection with helper phage will produce virions containing single stranded DNA that corresponds to the coding strand. Therefore, single stranded sequencing should be performed using the T7 terminator primer (Cat. No. 69337-3).

0001 ATCCGGATAT AGTTCCTCCT TTCAGCAAAA AACCCCTCAA GACCCGTTTA GAGGCCCCAA 
0061 GGGGTTATGC TAGTTATTGC TCAGCGGTGG CAGCAGCCAA CTCAGCTTCC TTTCGGGCTT 
0121 TGTTAGCAGC CGGATCTCAG TGGTGGTGGT GGTGGTGCTC GAGTGCGGCC GCAAGCTTGT 
0181 CGACGGAGCT CGAATTCGGA TCCGATATCG CCATGGTTGA GGAGAAGCCC GGGCTCTTGT 
0241 CGTCGTCATC GGTACCCAGA TCTGGGCTGT CCATGTGCTG GCGTTCGAAT TTAGCAGCAG 
0301 CGGTTTCTTT CATACCAGAA CCGCGTGGCA CCAGACCAGA AGAATGATGA TGATGATGGT 
0361 GCATATGTAT ATCTCCTTCT TAAAGTTAAA CAAAATTATT TCTAGAGGGG AATTGTTATC 
0421 CGCTCACAAT TCCCCTATAG TGAGTCGTAT TAATTTCGCG GGATCGAGAT CGATCTCGAT 
0481 CCTCTACGCC GGACGCATCG TGGCCGGCAT CACCGGCGCC ACAGGTGCGG TTGCTGGCGC 
0541 CTATATCGCC GACATCACCG ATGGGGAAGA TCGGGCTCGC CACTTCGGGC TCATGAGCGC 
0601 TTGTTTCGGC GTGGGTATGG TGGCAGGCCC CGTGGCCGGG GGACTGTTGG GCGCCATCTC 
0661 CTTGCATGCA CCATTCCTTG CGGCGGCGGT GCTCAACGGC CTCAACCTAC TACTGGGCTG 
0721 CTTCCTAATG CAGGAGTCGC ATAAGGGAGA GCGTCGAGAT CCCGGACACC ATCGAATGGC 
0781 GCAAAACCTT TCGCGGTATG GCATGATAGC GCCCGGAAGA GAGTCAATTC AGGGTGGTGA 
0841 ATGTGAAACC AGTAACGTTA TACGATGTCG CAGAGTATGC CGGTGTCTCT TATCAGACCG 
0901 TTTCCCGCGT GGTGAACCAG GCCAGCCACG TTTCTGCGAA AACGCGGGAA AAAGTGGAAG 
0961 CGGCGATGGC GGAGCTGAAT TACATTCCCA ACCGCGTGGC ACAACAACTG GCGGGCAAAC 
1021 AGTCGTTGCT GATTGGCGTT GCCACCTCCA GTCTGGCCCT GCACGCGCCG TCGCAAATTG 
1081 TCGCGGCGAT TAAATCTCGC GCCGATCAAC TGGGTGCCAG CGTGGTGGTG TCGATGGTAG 
1141 AACGAAGCGG CGTCGAAGCC TGTAAAGCGG CGGTGCACAA TCTTCTCGCG CAACGCGTCA 
1201 GTGGGCTGAT CATTAACTAT CCGCTGGATG ACCAGGATGC CATTGCTGTG GAAGCTGCCT 
1261 GCACTAATGT TCCGGCGTTA TTTCTTGATG TCTCTGACCA GACACCCATC AACAGTATTA 
1321 TTTTCTCCCA TGAAGACGGT ACGCGACTGG GCGTGGAGCA TCTGGTCGCA TTGGGTCACC 
1381 AGCAAATCGC GCTGTTAGCG GGCCCATTAA GTTCTGTCTC GGCGCGTCTG CGTCTGGCTG 
1441 GCTGGCATAA ATATCTCACT CGCAATCAAA TTCAGCCGAT AGCGGAACGG GAAGGCGACT 
1501 GGAGTGCCAT GTCCGGTTTT CAACAAACCA TGCAAATGCT GAATGAGGGC ATCGTTCCCA 
1561 CTGCGATGCT GGTTGCCAAC GATCAGATGG CGCTGGGCGC AATGCGCGCC ATTACCGAGT 
1621 CCGGGCTGCG CGTTGGTGCG GACATCTCGG TAGTGGGATA CGACGATACC GAAGACAGCT 
1681 CATGTTATAT CCCGCCGTTA ACCACCATCA AACAGGATTT TCGCCTGCTG GGGCAAACCA 
1741 GCGTGGACCG CTTGCTGCAA CTCTCTCAGG GCCAGGCGGT GAAGGGCAAT CAGCTGTTGC 
1801 CCGTCTCACT GGTGAAAAGA AAAACCACCC TGGCGCCCAA TACGCAAACC GCCTCTCCCC 
1861 GCGCGTTGGC CGATTCATTA ATGCAGCTGG CACGACAGGT TTCCCGACTG GAAAGCGGGC 
1921 AGTGAGCGCA ACGCAATTAA TGTAAGTTAG CTCACTCATT AGGCACCGGG ATCTCGACCG 
1981 ATGCCCTTGA GAGCCTTCAA CCCAGTCAGC TCCTTCCGGT GGGCGCGGGG CATGACTATC 
2041 GTCGCCGCAC TTATGACTGT CTTCTTTATC ATGCAACTCG TAGGACAGGT GCCGGCAGCG 
2101 CTCTGGGTCA TTTTCGGCGA GGACCGCTTT CGCTGGAGCG CGACGATGAT CGGCCTGTCG 
2161 CTTGCGGTAT TCGGAATCTT GCACGCCCTC GCTCAAGCCT TCGTCACTGG TCCCGCCACC 
2221 AAACGTTTCG GCGAGAAGCA GGCCATTATC GCCGGCATGG CGGCCCCACG GGTGCGCATG 
2281 ATCGTGCTCC TGTCGTTGAG GACCCGGCTA GGCTGGCGGG GTTGCCTTAC TGGTTAGCAG 
2341 AATGAATCAC CGATACGCGA GCGAACGTGA AGCGACTGCT GCTGCAAAAC GTCTGCGACC 
2401 TGAGCAACAA CATGAATGGT CTTCGGTTTC CGTGTTTCGT AAAGTCTGGA AACGCGGAAG 
2461 TCAGCGCCCT GCACCATTAT GTTCCGGATC TGCATCGCAG GATGCTGCTG GCTACCCTGT 
2521 GGAACACCTA CATCTGTATT AACGAAGCGC TGGCATTGAC CCTGAGTGAT TTTTCTCTGG 
2581 TCCCGCCGCA TCCATACCGC CAGTTGTTTA CCCTCACAAC GTTCCAGTAA CCGGGCATGT 
2641 TCATCATCAG TAACCCGTAT CGTGAGCATC CTCTCTCGTT TCATCGGTAT CATTACCCCC 
2701 ATGAACAGAA ATCCCCCTTA CACGGAGGCA TCAGTGACCA AACAGGAAAA AACCGCCCTT 
2761 AACATGGCCC GCTTTATCAG AAGCCAGACA TTAACGCTTC TGGAGAAACT CAACGAGCTG 
2821 GACGCGGATG AACAGGCAGA CATCTGTGAA TCGCTTCACG ACCACGCTGA TGAGCTTTAC 
2881 CGCAGCTGCC TCGCGCGTTT CGGTGATGAC GGTGAAAACC TCTGACACAT GCAGCTCCCG 
2941 GAGACGGTCA CAGCTTGTCT GTAAGCGGAT GCCGGGAGCA GACAAGCCCG TCAGGGCGCG 
3001 TCAGCGGGTG TTGGCGGGTG TCGGGGCGCA GCCATGACCC AGTCACGTAG CGATAGCGGA 
3061 GTGTATACTG GCTTAACTAT GCGGCATCAG AGCAGATTGT ACTGAGAGTG CACCATATAT 
3121 GCGGTGTGAA ATACCGCACA GATGCGTAAG GAGAAAATAC CGCATCAGGC GCTCTTCCGC 
3181 TTCCTCGCTC ACTGACTCGC TGCGCTCGGT CGTTCGGCTG CGGCGAGCGG TATCAGCTCA 
3241 CTCAAAGGCG GTAATACGGT TATCCACAGA ATCAGGGGAT AACGCAGGAA AGAACATGTG 
3301 AGCAAAAGGC CAGCAAAAGG CCAGGAACCG TAAAAAGGCC GCGTTGCTGG CGTTTTTCCA 
3361 TAGGCTCCGC CCCCCTGACG AGCATCACAA AAATCGACGC TCAAGTCAGA GGTGGCGAAA 
3421 CCCGACAGGA CTATAAAGAT ACCAGGCGTT TCCCCCTGGA AGCTCCCTCG TGCGCTCTCC 
3481 TGTTCCGACC CTGCCGCTTA CCGGATACCT GTCCGCCTTT CTCCCTTCGG GAAGCGTGGC 
3541 GCTTTCTCAT AGCTCACGCT GTAGGTATCT CAGTTCGGTG TAGGTCGTTC GCTCCAAGCT 
3601 GGGCTGTGTG CACGAACCCC CCGTTCAGCC CGACCGCTGC GCCTTATCCG GTAACTATCG 
3661 TCTTGAGTCC AACCCGGTAA GACACGACTT ATCGCCACTG GCAGCAGCCA CTGGTAACAG 
3721 GATTAGCAGA GCGAGGTATG TAGGCGGTGC TACAGAGTTC TTGAAGTGGT GGCCTAACTA 
3781 CGGCTACACT AGAAGGACAG TATTTGGTAT CTGCGCTCTG CTGAAGCCAG TTACCTTCGG 
3841 AAAAAGAGTT GGTAGCTCTT GATCCGGCAA ACAAACCACC GCTGGTAGCG GTGGTTTTTT 
3901 TGTTTGCAAG CAGCAGATTA CGCGCAGAAA AAAAGGATCT CAAGAAGATC CTTTGATCTT 
3961 TTCTACGGGG TCTGACGCTC AGTGGAACGA AAACTCACGT TAAGGGATTT TGGTCATGAA 
4021 CAATAAAACT GTCTGCTTAC ATAAACAGTA ATACAAGGGG TGTTATGAGC CATATTCAAC 
4081 GGGAAACGTC TTGCTCTAGG CCGCGATTAA ATTCCAACAT GGATGCTGAT TTATATGGGT 
4141 ATAAATGGGC TCGCGATAAT GTCGGGCAAT CAGGTGCGAC AATCTATCGA TTGTATGGGA 
4201 AGCCCGATGC GCCAGAGTTG TTTCTGAAAC ATGGCAAAGG TAGCGTTGCC AATGATGTTA 
4261 CAGATGAGAT GGTCAGACTA AACTGGCTGA CGGAATTTAT GCCTCTTCCG ACCATCAAGC 
4321 ATTTTATCCG TACTCCTGAT GATGCATGGT TACTCACCAC TGCGATCCCC GGGAAAACAG 
4381 CATTCCAGGT ATTAGAAGAA TATCCTGATT CAGGTGAAAA TATTGTTGAT GCGCTGGCAG 
4441 TGTTCCTGCG CCGGTTGCAT TCGATTCCTG TTTGTAATTG TCCTTTTAAC AGCGATCGCG 
4501 TATTTCGTCT CGCTCAGGCG CAATCACGAA TGAATAACGG TTTGGTTGAT GCGAGTGATT 
4561 TTGATGACGA GCGTAATGGC TGGCCTGTTG AACAAGTCTG GAAAGAAATG CATAAACTTT 
4621 TGCCATTCTC ACCGGATTCA GTCGTCACTC ATGGTGATTT CTCACTTGAT AACCTTATTT 
4681 TTGACGAGGG GAAATTAATA GGTTGTATTG ATGTTGGACG AGTCGGAATC GCAGACCGAT 
4741 ACCAGGATCT TGCCATCCTA TGGAACTGCC TCGGTGAGTT TTCTCCTTCA TTACAGAAAC 
4801 GGCTTTTTCA AAAATATGGT ATTGATAATC CTGATATGAA TAAATTGCAG TTTCATTTGA 
4861 TGCTCGATGA GTTTTTCTAA GAATTAATTC ATGAGCGGAT ACATATTTGA ATGTATTTAG 
4921 AAAAATAAAC AAATAGGGGT TCCGCGCACA TTTCCCCGAA AAGTGCCACC TGAAATTGTA 
4981 AACGTTAATA TTTTGTTAAA ATTCGCGTTA AATTTTTGTT AAATCAGCTC ATTTTTTAAC 
5041 CAATAGGCCG AAATCGGCAA AATCCCTTAT AAATCAAAAG AATAGACCGA GATAGGGTTG 
5101 AGTGTTGTTC CAGTTTGGAA CAAGAGTCCA CTATTAAAGA ACGTGGACTC CAACGTCAAA 
5161 GGGCGAAAAA CCGTCTATCA GGGCGATGGC CCACTACGTG AACCATCACC CTAATCAAGT 
5221 TTTTTGGGGT CGAGGTGCCG TAAAGCACTA AATCGGAACC CTAAAGGGAG CCCCCGATTT 
5281 AGAGCTTGAC GGGGAAAGCC GGCGAACGTG GCGAGAAAGG AAGGGAAGAA AGCGAAAGGA 
5341 GCGGGCGCTA GGGCGCTGGC AAGTGTAGCG GTCACGCTGC GCGTAACCAC CACACCCGCC 
5401 GCGCTTAATG CGCCGCTACA GGGCGCGTCC CATTCGCCA