pCDNA6.2/EmGFP-Bsd/V5-DEST實(shí)際上是一個雙表達(dá)框載體，PGK啟動子帶一個EmGFP熒光標(biāo)記基因，CMV啟動子調(diào)控外源基因的表達(dá)。不過，外源基因插入CMV啟動子后，只能用LR重組的方法實(shí)現(xiàn)，所以，外源基因需要先構(gòu)建至Entry載體上，例如pENTR/D-TOPO等。

pCDNA6.2/EmGFP-Bsd/V5-DEST空載上，CMV啟動子后有ccdB表達(dá)框，所以此載體只能在DB3.1等專用的大腸桿菌中才能復(fù)制擴(kuò)增，使用此載體時，請注意配套相應(yīng)的DB3.1感受態(tài)。當(dāng)外源基因成功插入，ccdB表達(dá)框?qū)⒈恢脫Q掉，此時，重組質(zhì)粒可以在DH5α等常規(guī)大腸桿菌中復(fù)制擴(kuò)增。

0001 GACGGATCGG GAGATCTCCC GATCCCCTAT GGTGCACTCT CAGTACAATC TGCTCTGATG 
0061 CCGCATAGTT AAGCCAGTAT CTGCTCCCTG CTTGTGTGTT GGAGGTCGCT GAGTAGTGCG 
0121 CGAGCAAAAT TTAAGCTACA ACAAGGCAAG GCTTGACCGA CAATTGCATG AAGAATCTGC 
0181 TTAGGGTTAG GCGTTTTGCG CTGCTTCGCG ATGTACGGGC CAGATATACG CGTTGACATT 
0241 GATTATTGAC TAGTTATTAA TAGTAATCAA TTACGGGGTC ATTAGTTCAT AGCCCATATA 
0301 TGGAGTTCCG CGTTACATAA CTTACGGTAA ATGGCCCGCC TGGCTGACCG CCCAACGACC 
0361 CCCGCCCATT GACGTCAATA ATGACGTATG TTCCCATAGT AACGCCAATA GGGACTTTCC 
0421 ATTGACGTCA ATGGGTGGAG TATTTACGGT AAACTGCCCA CTTGGCAGTA CATCAAGTGT 
0481 ATCATATGCC AAGTACGCCC CCTATTGACG TCAATGACGG TAAATGGCCC GCCTGGCATT 
0541 ATGCCCAGTA CATGACCTTA TGGGACTTTC CTACTTGGCA GTACATCTAC GTATTAGTCA 
0601 TCGCTATTAC CATGGTGATG CGGTTTTGGC AGTACATCAA TGGGCGTGGA TAGCGGTTTG 
0661 ACTCACGGGG ATTTCCAAGT CTCCACCCCA TTGACGTCAA TGGGAGTTTG TTTTGGCACC 
0721 AAAATCAACG GGACTTTCCA AAATGTCGTA ACAACTCCGC CCCATTGACG CAAATGGGCG 
0781 GTAGGCGTGT ACGGTGGGAG GTCTATATAA GCAGAGCTCT CTGGCTAACT AGAGAACCCA 
0841 CTGCTTACTG GCTTATCGAA ATTAATACGA CTCACTATAG GGAGACCCAA GCTGGCTAGT 
0901 TAAGCTATCA ACAAGTTTGT ACAAAAAAGC TGAACGAGAA ACGTAAAATG ATATAAATAT 
0961 CAATATATTA AATTAGATTT TGCATAAAAA ACAGACTACA TAATACTGTA AAACACAACA 
1021 TATCCAGTCA CTATGAATCA ACTACTTAGA TGGTATTAGT GACCTGTAGT CGACCGACAG 
1081 CCTTCCAAAT GTTCTTCGGG TGATGCTGCC AACTTAGTCG ACCGACAGCC TTCCAAATGT 
1141 TCTTCTCAAA CGGAATCGTC GTATCCAGCC TACTCGCTAT TGTCCTCAAT GCCGTATTAA 
1201 ATCATAAAAA GAAATAAGAA AAAGAGGTGC GAGCCTCTTT TTTGTGTGAC AAAATAAAAA 
1261 CATCTACCTA TTCATATACG CTAGTGTCAT AGTCCTGAAA ATCATCTGCA TCAAGAACAA 
1321 TTTCACAACT CTTATACTTT TCTCTTACAA GTCGTTCGGC TTCATCTGGA TTTTCAGCCT 
1381 CTATACTTAC TAAACGTGAT AAAGTTTCTG TAATTTCTAC TGTATCGACC TGCAGACTGG 
1441 CTGTGTATAA GGGAGCCTGA CATTTATATT CCCCAGAACA TCAGGTTAAT GGCGTTTTTG 
1501 ATGTCATTTT CGCGGTGGCT GAGATCAGCC ACTTCTTCCC CGATAACGGA GACCGGCACA 
1561 CTGGCCATAT CGGTGGTCAT CATGCGCCAG CTTTCATCCC CGATATGCAC CACCGGGTAA 
1621 AGTTCACGGG AGACTTTATC TGACAGCAGA CGTGCACTGG CCAGGGGGAT CACCATCCGT 
1681 CGCCCGGGCG TGTCAATAAT ATCACTCTGT ACATCCACAA ACAGACGATA ACGGCTCTCT 
1741 CTTTTATAGG TGTAAACCTT AAACTGCATT TCACCAGTCC CTGTTCTCGT CAGCAAAAGA 
1801 GCCGTTCATT TCAATAAACC GGGCGACCTC AGCCATCCCT TCCTGATTTT CCGCTTTCCA 
1861 GCGTTCGGCA CGCAGACGAC GGGCTTCATT CTGCATGGTT GTGCTTACCA GACCGGAGAT 
1921 ATTGACATCA TATATGCCTT GAGCAACTGA TAGCTGTCGC TGTCAACTGT CACTGTAATA 
1981 CGCTGCTTCA TAGCACACCT CTTTTTGACA TACTTCGGGT ATACATATCA GTATATATTC 
2041 TTATACCGCA AAAATCAGCG CGCAAATACG CATACTGTTA TCTGGCTTTT AGTAAGCCGG 
2101 ATCCACGCGG CGTTTACGCC CCGCCCTGCC ACTCATCGCA GTACTGTTGT AATTCATTAA 
2161 GCATTCTGCC GACATGGAAG CCATCACAAA CGGCATGATG AACCTGAATC GCCAGCGGCA 
2221 TCAGCACCTT GTCGCCTTGC GTATAATATT TGCCCATGGT GAAAACGGGG GCGAAGAAGT 
2281 TGTCCATATT GGCCACGTTT AAATCAAAAC TGGTGAAACT CACCCAGGGA TTGGCTGAGA 
2341 CGAAAAACAT ATTCTCAATA AACCCTTTAG GGAAATAGGC CAGGTTTTCA CCGTAACACG 
2401 CCACATCTTG CGAATATATG TGTAGAAACT GCCGGAAATC GTCGTGGTAT TCACTCCAGA 
2461 GCGATGAAAA CGTTTCAGTT TGCTCATGGA AAACGGTGTA ACAAGGGTGA ACACTATCCC 
2521 ATATCACCAG CTCACCGTCT TTCATTGCCA TACGGAATTC CGGATGAGCA TTCATCAGGC 
2581 GGGCAAGAAT GTGAATAAAG GCCGGATAAA ACTTGTGCTT ATTTTTCTTT ACGGTCTTTA 
2641 AAAAGGCCGT AATATCCAGC TGAACGGTCT GGTTATAGGT ACATTGAGCA ACTGACTGAA 
2701 ATGCCTCAAA ATGTTCTTTA CGATGCCATT GGGATATATC AACGGTGGTA TATCCAGTGA 
2761 TTTTTTTCTC CATTTTAGCT TCCTTAGCTC CTGAAAATCT CGATAACTCA AAAAATACGC 
2821 CCGGTAGTGA TCTTATTTCA TTATGGTGAA AGTTGGAACC TCTTACGTGC CGATCAACGT 
2881 CTCATTTTCG CCAAAAGTTG GCCCAGGGCT TCCCGGTATC AACAGGGACA CCAGGATTTA 
2941 TTTATTCTGC GAAGTGATCT TCCGTCACAG GTATTTATTC GGCGCAAAGT GCGTCGGGTG 
3001 ATGCTGCCAA CTTAGTCGAC TACAGGTCAC TAATACCATC TAAGTAGTTG ATTCATAGTG 
3061 ACTGGATATG TTGTGTTTTA CAGTATTATG TAGTCTGTTT TTTATGCAAA ATCTAATTTA 
3121 ATATATTGAT ATTTATATCA TTTTACGTTT CTCGTTCAGC TTTCTTGTAC AAAGTGGTTG 
3181 ATCTAGAGGG CCCGCGGTTC GAAGGTAAGC CTATCCCTAA CCCTCTCCTC GGTCTCGATT 
3241 CTACGCGTAC CGGTTAGTAA TGAGTTTAAA CGGGGGAGGC TAACTGAAAC ACGGAAGGAG 
3301 ACAATACCGG AAGGAACCCG CGCTATGACG GCAATAAAAA GACAGAATAA AACGCACGGG 
3361 TGTTGGGTCG TTTGTTCATA AACGCGGGGT TCGGTCCCAG GGCTGGCACT CTGTCGATAC 
3421 CCCACCGAGA CCCCATTGGG GCCAATACGC CCGCGTTTCT TCCTTTTCCC CACCCCACCC 
3481 CCCAAGTTCG GGTGAAGGCC CAGGGCTCGC AGCCAACGTC GGGGCGGCAG GCCCTGCCAT 
3541 AGCAGATCTG CGCAGCTGGG GCTCTAGGGG GTATCCCCAC GCGCCCTGTA GCGGCGCATT 
3601 AAGCGCGGCG GGTGTGGTGG TTACGCGCAG CGTGACCGCT ACACTTGCCA GCGCCCTAGC 
3661 GCCCGCTCCT TTCGCTTTCT TCCCTTCCTT TCTCGCCACG TTCGCCGGCT TTCCCCGTCA 
3721 AGCTCTAAAT CGGGGGCTCC CTTTAGGGTT CCGATTTAGT GCTTTACGGC ACCTCGACCC 
3781 CAAAAAACTT GATTAGGGTG ATGGTTCACG TAGTGGGCCA TCGCCCTGAT AGACGGTTTT 
3841 TCGCCCTTTG ACGTTGGAGT CCACGTTCTT TAATAGTGGA CTCTTGTTCC AAACTGGAAC 
3901 AACACTCAAC CCTATCTCGG TCTATTCTTT TGATTTATAA GGGATTTTGC CGATTTCGGC 
3961 CTATTGGTTA AAAAATGAGC TGATTTAACA AAAATTTAAC GCGAATTATC CTCGAGCTAC 
4021 CGGGTAGGGG AGGCGCTTTT CCCAAGGCAG TCTGGAGCAT GCGCTTTAGC AGCCCCGCTG 
4081 GGCACTTGGC GCTACACAAG TGGCCTCTGG CCTCGCACAC ATTCCACATC CACCGGTAGG 
4141 CGCCAACCGG CTCCGTTCTT TGGTGGCCCC TTCGCGCCAC CTTCTACTCC TCCCCTAGTC 
4201 AGGAAGTTCC CCCCCGCCCC GCAGCTCGCG TCGTGCAGGA CGTGACAAAT GGAAGTAGCA 
4261 CGTCTCACTA GTCTCGTGCA GATGGACAGC ACCGCTGAGC AATGGAAGCG GGTAGGCCTT 
4321 TGGGGCAGCG GCCAATAGCA GCTTTGCTCC TTCGCTTTCT GGGCTCAGAG GCTGGGAAGG 
4381 GGTGGGTCCG GGGGCGGGCT CAGGGGCGGG CTCAGGGGCG GGGCGGGCGC CCGAAGGTCC 
4441 TCCGGAGGCC CGGCATTCTG CACGCTTCAA AAGCGCACGT CTGCCGCGCT GTTCTCCTCT 
4501 TCCTCATCTC CGGGCCTTTC GACTCTAGAC ACGTGTTGAC AATTAATCAT CGGCATAGTA 
4561 TATCGGCATA GTATAATACG ACAAGGTGAG GAACTAAACC ATGGTGAGCA AGGGCGAGGA 
4621 GCTGTTCACC GGGGTGGTGC CCATCCTGGT CGAGCTGGAC GGCGACGTAA ACGGCCACAA 
4681 GTTCAGCGTG TCCGGCGAGG GCGAGGGCGA TGCCACCTAC GGCAAGCTGA CCCTGAAGTT 
4741 CATCTGCACC ACCGGCAAGC TGCCCGTGCC CTGGCCCACC CTCGTGACCA CCTTCACCTA 
4801 CGGCGTGCAG TGCTTCGCCC GCTACCCCGA CCACATGAAG CAGCACGACT TCTTCAAGTC 
4861 CGCCATGCCC GAAGGCTACG TCCAGGAGCG CACCATCTTC TTCAAGGACG ACGGCAACTA 
4921 CAAGACCCGC GCCGAGGTGA AGTTCGAGGG CGACACCCTG GTGAACCGCA TCGAGCTGAA 
4981 GGGCATCGAC TTCAAGGAGG ACGGCAACAT CCTGGGGCAC AAGCTGGAGT ACAACTACAA 
5041 CAGCCACAAG GTCTATATCA CCGCCGACAA GCAGAAGAAC GGCATCAAGG TGAACTTCAA 
5101 GACCCGCCAC AACATCGAGG ACGGCAGCGT GCAGCTCGCC GACCACTACC AGCAGAACAC 
5161 CCCCATCGGC GACGGCCCCG TGCTGCTGCC CGACAACCAC TACCTGAGCA CCCAGTCCGC 
5221 CCTGAGCAAA GACCCCAACG AGAAGCGCGA TCACATGGTC CTGCTGGAGT TCGTGACCGC 
5281 CGCCGGGATC ACTCTCGGCA TGGACGAGCT GTACAAGGCC AAGCCTTTGT CTCAAGAAGA 
5341 ATCCACCCTC ATTGAAAGAG CAACGGCTAC AATCAACAGC ATCCCCATCT CTGAAGACTA 
5401 CAGCGTCGCC AGCGCAGCTC TCTCTAGCGA CGGCCGCATC TTCACTGGTG TCAATGTATA 
5461 TCATTTTACT GGGGGACCTT GTGCAGAACT CGTGGTGCTG GGCACTGCTG CTGCTGCGGC 
5521 AGCTGGCAAC CTGACTTGTA TCGTCGCGAT CGGAAATGAG AACAGGGGCA TCTTGAGCCC 
5581 CTGCGGACGG TGCCGACAGG TGCTTCTCGA TCTGCATCCT GGGATCAAAG CCATAGTGAA 
5641 GGACAGTGAT GGACAGCCGA CGGCAGTTGG GATTCGTGAA TTGCTGCCCT CTGGTTATGT 
5701 GTGGGAGGGC TAAGCACTTC GTGGCCGAGG AGCAGGACTG ACACGTGCTA CGAGATTTCG 
5761 ATTCCACCGC CGCCTTCTAT GAAAGGTTGG GCTTCGGAAT CGTTTTCCGG GACGCCGGCT 
5821 GGATGATCCT CCAGCGCGGG GATCTCATGC TGGAGTTCTT CGCCCACCCC AACTTGTTTA 
5881 TTGCAGCTTA TAATGGTTAC AAATAAAGCA ATAGCATCAC AAATTTCACA AATAAAGCAT 
5941 TTTTTTCACT GCATTCTAGT TGTGGTTTGT CCAAACTCAT CAATGTATCT TATCATGTCT 
6001 GTATACCGTC GACCTCTAGC TAGAGCTTGG CGTAATCATG GTCATAGCTG TTTCCTGTGT 
6061 GAAATTGTTA TCCGCTCACA ATTCCACACA ACATACGAGC CGGAAGCATA AAGTGTAAAG 
6121 CCTGGGGTGC CTAATGAGTG AGCTAACTCA CATTAATTGC GTTGCGCTCA CTGCCCGCTT 
6181 TCCAGTCGGG AAACCTGTCG TGCCAGCTGC ATTAATGAAT CGGCCAACGC GCGGGGAGAG 
6241 GCGGTTTGCG TATTGGGCGC TCTTCCGCTT CCTCGCTCAC TGACTCGCTG CGCTCGGTCG 
6301 TTCGGCTGCG GCGAGCGGTA TCAGCTCACT CAAAGGCGGT AATACGGTTA TCCACAGAAT 
6361 CAGGGGATAA CGCAGGAAAG AACATGTGAG CAAAAGGCCA GCAAAAGGCC AGGAACCGTA 
6421 AAAAGGCCGC GTTGCTGGCG TTTTTCCATA GGCTCCGCCC CCCTGACGAG CATCACAAAA 
6481 ATCGACGCTC AAGTCAGAGG TGGCGAAACC CGACAGGACT ATAAAGATAC CAGGCGTTTC 
6541 CCCCTGGAAG CTCCCTCGTG CGCTCTCCTG TTCCGACCCT GCCGCTTACC GGATACCTGT 
6601 CCGCCTTTCT CCCTTCGGGA AGCGTGGCGC TTTCTCATAG CTCACGCTGT AGGTATCTCA 
6661 GTTCGGTGTA GGTCGTTCGC TCCAAGCTGG GCTGTGTGCA CGAACCCCCC GTTCAGCCCG 
6721 ACCGCTGCGC CTTATCCGGT AACTATCGTC TTGAGTCCAA CCCGGTAAGA CACGACTTAT 
6781 CGCCACTGGC AGCAGCCACT GGTAACAGGA TTAGCAGAGC GAGGTATGTA GGCGGTGCTA 
6841 CAGAGTTCTT GAAGTGGTGG CCTAACTACG GCTACACTAG AAGAACAGTA TTTGGTATCT 
6901 GCGCTCTGCT GAAGCCAGTT ACCTTCGGAA AAAGAGTTGG TAGCTCTTGA TCCGGCAAAC 
6961 AAACCACCGC TGGTAGCGGT GGTTTTTTTG TTTGCAAGCA GCAGATTACG CGCAGAAAAA 
7021 AAGGATCTCA AGAAGATCCT TTGATCTTTT CTACGGGGTC TGACGCTCAG TGGAACGAAA 
7081 ACTCACGTTA AGGGATTTTG GTCATGAGAT TATCAAAAAG GATCTTCACC TAGATCCTTT 
7141 TAAATTAAAA ATGAAGTTTT AAATCAATCT AAAGTATATA TGAGTAAACT TGGTCTGACA 
7201 GTTACCAATG CTTAATCAGT GAGGCACCTA TCTCAGCGAT CTGTCTATTT CGTTCATCCA 
7261 TAGTTGCCTG ACTCCCCGTC GTGTAGATAA CTACGATACG GGAGGGCTTA CCATCTGGCC 
7321 CCAGTGCTGC AATGATACCG CGAGACCCAC GCTCACCGGC TCCAGATTTA TCAGCAATAA 
7381 ACCAGCCAGC CGGAAGGGCC GAGCGCAGAA GTGGTCCTGC AACTTTATCC GCCTCCATCC 
7441 AGTCTATTAA TTGTTGCCGG GAAGCTAGAG TAAGTAGTTC GCCAGTTAAT AGTTTGCGCA 
7501 ACGTTGTTGC CATTGCTACA GGCATCGTGG TGTCACGCTC GTCGTTTGGT ATGGCTTCAT 
7561 TCAGCTTCGG TTCCCAACGA TCAAGGCGAG TTACATGATC CCCCATGTTG TGCAAAAAAG 
7621 CGGTTAGCTC CTTCGGTCCT CCGATCGTTG TCAGAAGTAA GTTGGCCGCA GTGTTATCAC 
7681 TCATGGTTAT GGCAGCACTG CATAATTCTC TTACTGTCAT GCCATCCGTA AGATGCTTTT 
7741 CTGTGACTGG TGAGTACTCA ACCAAGTCAT TCTGAGAATA GTGTATGCGG CGACCGAGTT 
7801 GCTCTTGCCC GGCGTCAATA CGGGATAATA CCGCGCCACA TAGCAGAACT TTAAAAGTGC 
7861 TCATCATTGG AAAACGTTCT TCGGGGCGAA AACTCTCAAG GATCTTACCG CTGTTGAGAT 
7921 CCAGTTCGAT GTAACCCACT CGTGCACCCA ACTGATCTTC AGCATCTTTT ACTTTCACCA 
7981 GCGTTTCTGG GTGAGCAAAA ACAGGAAGGC AAAATGCCGC AAAAAAGGGA ATAAGGGCGA 
8041 CACGGAAATG TTGAATACTC ATACTCTTCC TTTTTCAATA TTATTGAAGC ATTTATCAGG 
8101 GTTATTGTCT CATGAGCGGA TACATATTTG AATGTATTTA GAAAAATAAA CAAATAGGGG 
8161 TTCCGCGCAC ATTTCCCCGA AAAGTGCCAC CTGACGTC