pCold-SUMO2原核表達(dá)載體是在 pCold-SUMO1載體基礎(chǔ)上將step II(TGGAGCCACCCGCAGTTCGAAAAA)標(biāo)簽加在Xba I和終止密碼子之間改造而成，該載體啟動子(CS Promoter)來源于南極嗜冷細(xì)菌，在低溫下(15 度)才能啟動蛋白的表達(dá)。低溫下細(xì)菌生長緩慢，使得蛋白合成速度減慢，從而最大限度的提高了蛋白正確折疊的幾率，提高了蛋白可溶性表達(dá)，增強(qiáng)了活性蛋白的表達(dá)比率。該表達(dá)系統(tǒng)所包含的 SUMO tag可以極大地提高小分子量蛋白的表達(dá)量，而且進(jìn)一步提高了蛋白的可溶表達(dá)幾率。同時，試劑盒配備的SUMO Protease(含6×His標(biāo)簽)可特異性去除 SUMO tag，從而得到不含任何標(biāo)簽的重組蛋白。TEE信號肽可增強(qiáng)冷啟動子調(diào)控下目的蛋白的高表達(dá)。BL21(DE3)Chaprone E.coli 細(xì)菌中含有分子伴侶蛋白質(zhì)粒，其表達(dá)產(chǎn)物可協(xié)助重組蛋白正確折疊形成可溶活性蛋白。 分子伴侶蛋白質(zhì)粒為氯霉素抗性(chloramphenicol，Cmr)的表達(dá)受控于四環(huán)素(tetR)操縱子。

0001 AAGGAATGGT GTGGCCGATT AATCATAAAT ATGAAAAATA ATTGTTGCAT CACCCGCCAA 
0061 TGCGTGGCTT AATGCACATC AAATTGTGAG CGGATAACAA TTTGATGTGC TAGCGCATAT 
0121 CCAGTGTAGT AAGGCAAGTC CCTTCAAGAG TTATCGTTGA TACCCCTCGT AGTGCACATT 
0181 CCTTTAACGC TTCAAAATCT GTAAAGCACG CCATATCGCC GAAAGGCACA CTTAATTATT 
0241 AAGAGGTAAT ACACCATGAA TCACAAAGTG CATATGAATA GCAGCGGCAG CAGCGGCGGT 
0301 CATCACCATC ATCATCACGG CGGCAGCGGC GGCAGCGGGT CGGACTCAGA AGTCAATCAA 
0361 GAAGCTAAGC CAGAGGTCAA GCCAGAAGTC AAGCCTGAGA CTCACATCAA TTTAAAGGTG 
0421 TCCGATGGAT CTTCAGAGAT CTTCTTCAAG ATCAAAAAGA CCACTCCTTT AAGAAGGCTG 
0481 ATGGAAGCGT TCGCTAAAAG ACAGGGTAAG GAAATGGACT CCTTAAGATT CTTGTACGAC 
0541 GGTATTAGAA TTCAAGCTGA TCAGGCCCCT GAAGATTTGG ACATGGAGGA TAACGATATT 
0601 ATTGAGGCTC ACCGCGAACA GATTGGAGGC CTGGAGCTCG GTACCCTCGA GGGATCCGAA 
0661 TTCAAGCTTG TCGACCTGCA GTCTAGATGG AGCCACCCGC AGTTCGAAAA ATAGGTAATC 
0721 TCTGCTTAAA AGCACAGAAT CTAAGATCCC TGCCATTTGG CGGGGATTTT TTTATTTGTT 
0781 TTCAGGAAAT AAATAATCGA TCGCGTAATA AAATCTATTA TTATTTTTGT GAAGAATAAA 
0841 TTTGGGTGCA ATGAGAATGC GCAGGCCCTT TCGTCTCGCG CGTTTCGGTG ATGACGGTGA 
0901 AAACCTCTGA CACATGCAGC TCCCGGAGAC GGTCACAGCT TGTCTGTAAG CGGATGCCGG 
0961 GAGCAGACAA GCCCGTCAGG GCGCGTCAGC GGGTGTTGGC GGGTGTCGGG GCTGGCTTAA 
1021 CTATGCGGCA TCAGAGCAGA TTGTACTGAG AGTGCACCAT AAAATTGTAA ACGTTAATAT 
1081 TTTGTTAAAA TTCGCGTTAA ATTTTTGTTA AATCAGCTCA TTTTTTAACC AATAGGCCGA 
1141 AATCGGCAAA ATCCCTTATA AATCAAAAGA ATAGCCCGAG ATAGGGTTGA GTGTTGTTCC 
1201 AGTTTGGAAC AAGAGTCCAC TATTAAAGAA CGTGGACTCC AACGTCAAAG GGCGAAAAAC 
1261 CGTCTATCAG GGCGATGGCC CACTACGTGA ACCATCACCC AAATCAAGTT TTTTGGGGTC 
1321 GAGGTGCCGT AAAGCACTAA ATCGGAACCC TAAAGGGAGC CCCCGATTTA GAGCTTGACG 
1381 GGGAAAGCCG GCGAACGTGG CGAGAAAGGA AGGGAAGAAA GCGAAAGGAG CGGGCGCTAG 
1441 GGCGCTGGCA AGTGTAGCGG TCACGCTGCG CGTAACCACC ACACCCGCCG CGCTTAATGC 
1501 GCCGCTACAG GGCGCGTACT ATGGTTGCTT TGACGTATGC GGTGTGAAAT ACCGCACAGA 
1561 TGCGTAAGGA GAAAATACCG CATCAGGCGT CAGGTGGCAC TTTTCGGGGA AATGTGCGCG 
1621 GAACCCCTAT TTGTTTATTT TTCTAAATAC ATTCAAATAT GTATCCGCTC ATGAGACAAT 
1681 AACCCTGATA AATGCTTCAA TAATATTGAA AAAGGAAGAG TATGAGTATT CAACATTTCC 
1741 GTGTCGCCCT TATTCCCTTT TTTGCGGCAT TTTGCCTTCC TGTTTTTGCT CACCCAGAAA 
1801 CGCTGGTGAA AGTAAAAGAT GCTGAAGATC AGTTGGGTGC ACGAGTGGGT TACATCGAAC 
1861 TGGATCTCAA CAGCGGTAAG ATCCTTGAGA GTTTTCGCCC CGAAGAACGT TTTCCAATGA 
1921 TGAGCACTTT TAAAGTTCTG CTATGTGGCG CGGTATTATC CCGTATTGAC GCCGGGCAAG 
1981 AGCAACTCGG TCGCCGCATA CACTATTCTC AGAATGACTT GGTTGAGTAC TCACCAGTCA 
2041 CAGAAAAGCA TCTTACGGAT GGCATGACAG TAAGAGAATT ATGCAGTGCT GCCATAACCA 
2101 TGAGTGATAA CACTGCGGCC AACTTACTTC TGACAACGAT CGGAGGACCG AAGGAGCTAA 
2161 CCGCTTTTTT GCACAACATG GGGGATCATG TAACTCGCCT TGATCGTTGG GAACCGGAGC 
2221 TGAATGAAGC CATACCAAAC GACGAGCGTG ACACCACGAT GCCTGTAGCA ATGGCAACAA 
2281 CGTTGCGCAA ACTATTAACT GGCGAACTAC TTACTCTAGC TTCCCGGCAA CAATTAATAG 
2341 ACTGGATGGA GGCGGATAAA GTTGCAGGAC CACTTCTGCG CTCGGCCCTT CCGGCTGGCT 
2401 GGTTTATTGC TGATAAATCT GGAGCCGGTG AGCGTGGGTC TCGCGGTATC ATTGCAGCAC 
2461 TGGGGCCAGA TGGTAAGCCC TCCCGTATCG TAGTTATCTA CACGACGGGG AGTCAGGCAA 
2521 CTATGGATGA ACGAAATAGA CAGATCGCTG AGATAGGTGC CTCACTGATT AAGCATTGGT 
2581 AACTGTCAGA CCAAGTTTAC TCATATATAC TTTAGATTGA TTTAAAACTT CATTTTTAAT 
2641 TTAAAAGGAT CTAGGTGAAG ATCCTTTTTG ATAATCTCAT GACCAAAATC CCTTAACGTG 
2701 AGTTTTCGTT CCACTGAGCG TCAGACCCCG TAGAAAAGAT CAAAGGATCT TCTTGAGATC 
2761 CTTTTTTTCT GCGCGTAATC TGCTGCTTGC AAACAAAAAA ACCACCGCTA CCAGCGGTGG 
2821 TTTGTTTGCC GGATCAAGAG CTACCAACTC TTTTTCCGAA GGTAACTGGC TTCAGCAGAG 
2881 CGCAGATACC AAATACTGTT CTTCTAGTGT AGCCGTAGTT AGGCCACCAC TTCAAGAACT 
2941 CTGTAGCACC GCCTACATAC CTCGCTCTGC TAATCCTGTT ACCAGTGGCT GCTGCCAGTG 
3001 GCGATAAGTC GTGTCTTACC GGGTTGGACT CAAGACGATA GTTACCGGAT AAGGCGCAGC 
3061 GGTCGGGCTG AACGGGGGGT TCGTGCACAC AGCCCAGCTT GGAGCGAACG ACCTACACCG 
3121 AACTGAGATA CCTACAGCGT GAGCTATGAG AAAGCGCCAC GCTTCCCGAA GGGAGAAAGG 
3181 CGGACAGGTA TCCGGTAAGC GGCAGGGTCG GAACAGGAGA GCGCACGAGG GAGCTTCCAG 
3241 GGGGAAACGC CTGGTATCTT TATAGTCCTG TCGGGTTTCG CCACCTCTGA CTTGAGCGTC 
3301 GATTTTTGTG ATGCTCGTCA GGGGGGCGGA GCCTATGGAA AAACGCCAGC AACGCGGCCT 
3361 TTTTACGGTT CCTGGCCTTT TGCTGGCCTT TTGCTCACAT AGTCATGCCC CGCGCCCACC 
3421 GGAAGGAGCT GACTGGGTTG AAGGCTCTCA AGGGCATCGG TCGAGATCCC GGTGCCTAAT 
3481 GAGTGAGCTA ACTTACATTA ATTGCGTTGC GCTCACTGCC CGCTTTCCAG TCGGGAAACC 
3541 TGTCGTGCCA GCTGCATTAA TGAATCGGCC AACGCGCGGG GAGAGGCGGT TTGCGTATTG 
3601 GGCGCCAGGG TGGTTTTTCT TTTCACCAGT GAGACGGGCA ACAGCTGATT GCCCTTCACC 
3661 GCCTGGCCCT GAGAGAGTTG CAGCAAGCGG TCCACGCTGG TTTGCCCCAG CAGGCGAAAA 
3721 TCCTGTTTGA TGGTGGTTAA CGGCGGGATA TAACATGAGC TGTCTTCGGT ATCGTCGTAT 
3781 CCCACTACCG AGATATCCGC ACCAACGCGC AGCCCGGACT CGGTAATGGC GCGCATTGCG 
3841 CCCAGCGCCA TCTGATCGTT GGCAACCAGC ATCGCAGTGG GAACGATGCC CTCATTCAGC 
3901 ATTTGCATGG TTTGTTGAAA ACCGGACATG GCACTCCAGT CGCCTTCCCG TTCCGCTATC 
3961 GGCTGAATTT GATTGCGAGT GAGATATTTA TGCCAGCCAG CCAGACGCAG ACGCGCCGAG 
4021 ACAGAACTTA ATGGGCCCGC TAACAGCGCG ATTTGCTGGT GACCCAATGC GACCAGATGC 
4081 TCCACGCCCA GTCGCGTACC GTCTTCATGG GAGAAAATAA TACTGTTGAT GGGTGTCTGG 
4141 TCAGAGACAT CAAGAAATAA CGCCGGAACA TTAGTGCAGG CAGCTTCCAC AGCAATGGCA 
4201 TCCTGGTCAT CCAGCGGATA GTTAATGATC AGCCCACTGA CGCGTTGCGC GAGAAGATTG 
4261 TGCACCGCCG CTTTACAGGC TTCGACGCCG CTTCGTTCTA CCATCGACAC CACCACGCTG 
4321 GCACCCAGTT GATCGGCGCG AGATTTAATC GCCGCGACAA TTTGCGACGG CGCGTGCAGG 
4381 GCCAGACTGG AGGTGGCAAC GCCAATCAGC AACGACTGTT TGCCCGCCAG TTGTTGTGCC 
4441 ACGCGGTTGG GAATGTAATT CAGCTCCGCC ATCGCCGCTT CCACTTTTTC CCGCGTTTTC 
4501 GCAGAAACGT GGCTGGCCTG GTTCACCACG CGGGAAACGG TCTGATAAGA GACACCGGCA 
4561 TACTCTGCGA CATCGTATAA CGTTACTGGT TTCACATTCA CCACCCTGAA TTGACTCTCT 
4621 TCCGGGCGCT ATCATGCCAT ACCGCGAAAG GTTTTGCGCC ATTCGATGGT GTCCGGGATC 
4681 TCGACGCTCT CCCTTATGCG ACTCCTGCAT TAGGAAGCAG CCCAGTAGTA GGTTGAGGCC 
4741 GTTGAGCACC GCCGCCGC